最佳的CAR T疗法验证需要一个模拟复杂肿瘤细胞结构的三维细胞系统。在发表于BMC Biotechnology的一项研究中，Dillard等人报告了从单一结直肠细胞系Caco-2发展成结直肠囊肿，作为验证CAR T介导治疗的简单可靠的工具。

　　CAR T细胞是T淋巴细胞，通过基因工程改造使其表面表达一种嵌合抗原受体(CAR)，可识别B淋巴细胞表面的CD19标志物，并促进控制裂解活化的信号传导事件。从而导致B淋巴细胞被破坏。由于CD19在癌变B细胞中广泛存在，因此CAR-T细胞被用作B细胞恶性肿瘤的同种异体治疗。CAR T介导的癌症免疫治疗彻底改变了"液体肿瘤"，即血液病的治疗，然而，由于CAR-T细胞无法在复杂的肿瘤微环境中存活并成功靶向所有的肿瘤生成细胞，其在实体肿瘤的治疗中效果不是很好。

　　因此，使用在培养的单层目标癌细胞中加入CAR-T细胞的二维(2-D)细胞系统来验证CAR-T细胞的功能和特异性是不够的，因为2-D系统并不能模拟具有挑战性的实体肿瘤的3-D形态和组织。此外，已有研究表明，与2-D相比，癌细胞在3-D球体中培养时会获得不同的基因表达谱，这可能会影响CAR-T细胞对癌细胞的识别。

　　为了创建一个简单的可用于CAR-T细胞验证的3-D细胞系统，作者利用了一种结直肠癌细胞系Caco-2的优势(该细胞系已被证明可以通过自身组织形成3-D囊肿样结构)，其上皮细胞的顶端表面朝向中央管腔。首先，他们用CD19基因转导Caco-2细胞，以确保细胞表面表达CD19抗原(CD19Caco-2细胞)。接下来，他们证明了CD19CAR-T细胞能够杀死CD19Caco-2细胞，就像在二维培养中一样有效，而Caco-2细胞保持完整。最后，他们证明了该系统与超分辨率显微镜、高通量实时成像和生物发光检测兼容;因此，可以用定性和定量的方法监测CAR-T细胞杀死癌细胞和破坏囊肿的能力。

　　这是一种简单和通用的方法，适用于已证实可形成类似简单3-D结构的多种癌细胞系。因此，它可以成为验证在不同癌症中CAR-T细胞治疗的有力工具。

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